一、普通照明方法
样本照明方法对于显微术至关重要。照明方法大体划分为透射照明和入射照明。必须根据标本和用途,选用适合的照明方法。
二、透射照明
照明样本的背面。该方法适用于无色透明细胞等样本的生物学观察,一般应用于生物显微镜。透射照明有两种类型:明视场和暗视场:
1、- 明视场照明
通常,该方法通过照明样本背面使其透明并进行观察。在明背景的映衬下,该方法可显示比背景更暗的部分。
2、- 暗视场照明
与明视场照明相同,该方法可照明背面,但是会阻断直射光的传播,从而在暗背景下显示样本的轮廓。该方法适用于观察低对比度细胞,必须与暗视场聚光镜搭配使用。
三、入射照明
照明样本的正面。该方法适用于观察3D物体,如材料和其他工业样本,以及不透明样本。这类照明方法一般应用于立体显微镜。
四、透射照明的类型
当通过装配聚光镜头的光学显微镜进行透射照明时,可划分为三种照明类型:柯勒照明、扩散照明和临界照明。
1、柯勒照明
该方法可将光线聚集到物镜的背面。该方法常用于透射照明,具有明亮且变化较小的照明功能。该方法对于高放大率观察是至关重要的。
2、扩散照明
该方法在反射器上设置了一块光扩散板,可实现均匀照明,但是在穿过光扩散板后,亮度有所减弱。
3、临界照明
该方法可将光线聚集到样本表面。该方法可实现明亮照明,但是更容易导致光线的不均匀分布。
五、光源差异
根据显微镜的不同,光源的选用也存在差异。只有了解每种光源的特性,才能选择适当的光源。
六、光学显微镜的光源
1、自然光(环境光)
外部光线进入反光镜,以照明样本。必须避免阳光直射。也可使用荧光灯等人造光源来替代自然光。
2、钨灯
钨灯也被称为白炽灯,价格便宜,便于购买,广泛用于光学显微镜。
3、卤素灯
与钨灯相比,卤素灯价格更贵,寿命更长,可发出近白色、亮度均匀的光。
七、荧光显微镜的光源
1、汞灯
汞灯也被称为高压汞灯,用作荧光观察光源,可激发与荧光材料匹配的波长。汞灯可在紫外线和近红外线等不同波长范围内实现大功率照明,并通过滤光片透射规定波长的光线。根据波长的不同,可选用对应的滤光片。当使用适当的荧光染料组合时,可选择特定荧光进行检测。另一种汞灯为金属卤化物灯,只有在高压电源供电的情况下才能工作。
2、氙气灯
氙气灯通常用作相机的闪光灯泡,具有亮度较高的特点。
3、LED灯
由于LED发射的光具有较窄的波段,将LED与荧光材料结合使用,或将多个LED结合使用,即可获得白光。LED灯具有体积小、功耗低、寿命长等特点,但是根据LED的组合方式,LED灯在特定波长下的功率较差。